Родился 18 декабря 1921 года в Демидове (ныне Смоленской области). Отец, Владимир Андреевич (1898—1964), демобилизовавшись из Красной Армии и окончив курсы Политпросвета, устроился в драматический театр в Демидове. Там же была актрисой и его мать, Лидия Ивановна (1902—1979).
В 1925 году его семья перебралась в Москву.
8 ноября 1939 года был призван в армию, служил в 115-м зенитно-артиллерийском полку. Во время советско-финской войны зенитная батарея, где он служил, находилась под Сестрорецком и охраняла воздушные подступы к Ленинграду. В Великую Отечественную войну воевал под Ленинградом до 1943 года. Весной 1943 года заболел воспалением лёгких и был отправлен в ленинградский госпиталь, а сразу после выписки оказался контужен во время авианалёта на Ленинград. После выписки в августе 1943-го Никулин был направлен в 72-й отдельный зенитный дивизион под Колпино. Был демобилизован в мае 1946 года в звании старшего сержанта; за время войны был награждён медалями «За отвагу», «За оборону Ленинграда» и «За победу над Германией».
После окончания войны пытался поступить во ВГИК и театральные институты, куда его не приняли, так как комиссии не обнаруживали в нём актёрских способностей. В конце концов, поступил в студию клоунады при Московском цирке на Цветном бульваре. Закончив обучение, стал работать ассистентом вместе с необычайно тогда популярным клоуном Карандашом. Работая у него, Юрий Никулин познакомился с Михаилом Шуйдиным. Вместе с Карандашом Никулин и Шуйдин неоднократно ездили на гастроли по стране и набирались циркового опыта. Никулин проработал с Карандашом два с половиной года, когда в 1950-м Шуйдин и Никулин вместе ушли от Карандаша из-за рабочего конфликта. Начав работать самостоятельно, они составили знаменитый клоунский дуэт Никулин и Шуйдин, хотя по характеру артисты были совершенно разные.
Никулин перестал выступать, когда ему исполнилось 60 лет, в 1981 году и перешёл на должность главного режиссёра цирка на Цветном бульваре. С 1984 года Никулин — директор цирка. При нём для цирка было построено полностью новое здание, открытие которого произошло в 1989 году. Всего строительство продолжалось четыре года.
Юрий Владимирович проработал в родном цирке 50 лет.
В 1949 году Юрий Никулин познакомился с Татьяной Покровской, которая вскоре стала его женой.
" Я училась в Тимирязевской академии на факультете декоративного садоводства и очень увлекалась конным спортом. В академии была прекрасная конюшня. А в конюшне - очень смешной жеребенок-карлик, с нормальной головой, нормальным корпусом, но на маленьких ножках. Звали его Лапоть. Об этом прослышал Карандаш и приехал эту лошадку посмотреть. Лошадка понравилась, и Карандаш попросил нас с подругой научить ее самым простым трюкам. Потом лошадку привезли в цирк, и Карандаш познакомил нас с Юрием Владимировичем Никулиным, который был у него в учениках. Юрий Владимирович пригласил нас посмотреть спектакль. Подруга моя пойти не смогла, я пошла одна, сидела на прожекторе. Играли очень смешную сценку: Карандаш вызывал из зала якобы одного зрителя и учил его ездить на лошади. Но именно когда я пришла на спектакль, Юрий Владимирович, который играл роль зрителя во время этого номера, попал под лошадь. Она его так избила, что его увезли на «скорой» в Склифосовского. Я чувствовала себя виноватой и стала его навещать… А через полгода мы поженились…"
14 ноября 1956 года в семье Никулиных родился сын Максим.
Юрий Владимирович Никулин скончался 21 августа 1997 после операции на сердце и похоронен на Новодевичьем кладбище.

Творчество
Юрий Владимирович Никулин играл во многих любимых народом фильмах. Самыми известными являются кинокомедии с участием Никулина — «Бриллиантовая рука», «12 стульев», «Старики-разбойники».
Никулин создал незабываемый образ Балбеса из знаменитой тройки (Трус, Балбес, Бывалый) в кинокомедиях Леонида Иовича Гайдая «Самогонщики» (1961), «Пес Барбос и необычный кросс» (1961), «Операция „Ы“ и другие приключения Шурика» (1965), «Кавказская пленница, или Новые приключения Шурика» (1967) и др.
Юрий Владимирович Никулин играл не только комические роли — следует отметить его игру в фильмах о Великой Отечественной войне («Они сражались за Родину», режиссёр С. Ф. Бондарчук; «Двадцать дней без войны», режиссёр А. Ю. Герман), в драматическом фильме «Когда деревья были большими» и в фильме Андрея Тарковского «Андрей Рублёв».
Кроме того, он вел юмористическую передачу «Белый попугай», являлся одним из постоянных участников передачи «В нашу гавань заходили корабли». Юрий Владимирович обладал такими настоящими человеческими качествами как доброта, искренность, забота. Его отличали высокая степень порядочности, интеллигентности, способность соучастия и помощи. В быту Юрий Владимирович был прост и непритязателен.
В 1991 году принимал участие в последнем выпуске капитал-шоу «Поле чудес» с Владиславом Листьевым.
Никулину присуждены звания Народного артиста СССР (1973) и Героя Социалистического труда (1990). Возле цирка на Цветном бульваре (ныне носящем имя Никулина), где работал Юрий Владимирович и который сейчас возглавляет его сын Максим Никулин, установлен бронзовый монумент.